- 更新時(shí)間2021-04-15
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紫外分光光度計(jì)由光源、單色器、吸收池和檢測(cè)器四部分組成。分析時(shí)當(dāng)特定強(qiáng)度的入射光束(Incident beam)通過(guò)裝有均勻待測(cè)物的介質(zhì)時(shí)，該光束將被部分吸收，未被吸收的光將透過(guò)(Emergent)待測(cè)物溶液以及通過(guò)散射(Scattering)、反射(Reflection)，包括在液面和容器表面的反射)而損失，這種損失有時(shí)可達(dá)10%，在樣品測(cè)量時(shí)必須同時(shí)采用參比池和參比溶液扣除這些影響。當(dāng)入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，待測(cè)溶液的吸光度與其濃度和液層厚度成正比（Lambert-Beer定律）。
紫外分光光度計(jì)的定量分析方法包括以下幾種：
1.絕d法
這是紫外分光光度計(jì)諸多分析方法中使用多的一種。這是一種以比耳定律A=εbc為基礎(chǔ)的分析方法。某一物質(zhì)在一定波長(zhǎng)下的ε值是一個(gè)常數(shù)，石英比色皿的光程是已知的，也是一個(gè)常數(shù)。因此，可用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在λmax波長(zhǎng)處，測(cè)定樣品溶液的吸光度值A(chǔ)。然后，根據(jù)比耳定律c=A/(εb)，則可求得該樣品溶液的含量或濃度。
2.標(biāo)準(zhǔn)法
在相同的測(cè)試條件下，分別測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液c標(biāo)和被測(cè)試樣品溶液（樣的吸光度A標(biāo)和A樣）。然后，按公式求得樣品溶液的濃度或含量。
3.比吸收系數(shù)法
由于紫外線(xiàn)可見(jiàn)分光光度計(jì)的雜散光、噪聲、基線(xiàn)平直度和光譜帶寬以及試樣的前處理、玄年的化學(xué)平衡等所引起的。因此，一般情況下不采用這種方法。
4.曲線(xiàn)法
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法是常用的定量分析方法。首先，用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制一定濃度的溶液，然后，將該溶液配制成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在一定波長(zhǎng)下，測(cè)試每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的濃度值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。后將樣品溶液按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制程序測(cè)得吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出樣品溶液對(duì)應(yīng)的濃度或含量。
